双峰驼T细胞CD3ε和CD4重组蛋白抗体对的制备

双峰驼是我国西北地区特有的动物,具有较强的地域文化特色,常年生活在自然环境恶劣的沙漠地带,但其具有较强的适应能力。根据已知的研究结果,双峰驼中有着特殊的黏膜免疫系统。我们都知道黏膜免疫系统在抵御外部病源入侵的过程中发挥着不可替代的作用,其中T细胞是参与保护反应的一类重要的效应细胞。本试验就双峰驼T细胞表明两类重要的分子CD3ε和CD4进行生物信息学分析,重组蛋白的原核表达和多克隆抗体制备方面的探究

易有料健康 2021-01-19 18:20:03

双峰驼是我国西北地区特有的动物,具有较强的地域文化特色,常年生活在自然环境恶劣的沙漠地带,但其具有较强的适应能力。根据已知的研究结果,双峰驼中有着特殊的黏膜免疫系统。我们都知道黏膜免疫系统在抵御外部病源入侵的过程中发挥着不可替代的作用,其中T细胞是参与保护反应的一类重要的效应细胞。本试验就双峰驼T细胞表明两类重要的分子CD3ε和CD4进行生物信息学分析,重组蛋白的原核表达和多克隆抗体制备方面的探究。

图1 CD3ε重组蛋白表达形式鉴定

为了获取CD3ε和CD4的重组蛋白和相应的多克隆抗体,首先在Genbank中查找收录的双峰驼CD3ε和CD4的核酸序列及氨基酸顺序,利用生物信息学分析软件对CD3ε和CD4跨膜区,信号肽及抗原指数和亲水性进行预测,以便于对所提取的抗体进行一个对照。之后选取CD3ε和CD4的膜外部分的氨基酸序列,并除去信号肽,通过人工合成这段氨基酸所对应的基因。然后将这段基因克隆到载体上,以特定的大肠杆菌进行诱导重组表达。之后我们获得的蛋白经过层析纯化后,去免疫经过培养健康的雄兔以制备多克隆抗体。从培养的雄兔中提取的血清,经过酶联免疫吸附试验,检测到了CD3ε和CD4的多抗血清效价,而WB检测抗体血清与各自抗原蛋白结合效果。

图2 CD3ε重组蛋白洗脱曲线

本试验可以为双峰驼T细胞分化增殖,功能发挥,信号传导以及特异性抗体治疗提供了可参考的资料。

文章来源 : 易有料健康

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